北京看白癜风医院哪家好 http://wapyyk.39.net/bj/zhuanke/89ac7.html摘要：嵌合抗原受体（CAR）-T细胞疗法彻底改变了免疫疗法领域，尤其是在血液疾病方面，具有很高的完全反应率。尽管肿瘤特异性抗原的多样性，但制造过程是一致的，并且涉及多个步骤，包括T细胞的选择，激活，基因修饰和体外扩增。在这些复杂的制造阶段中，需要评估和优化用于生成大量功能性细胞的培养系统的选择。烧瓶，袋子和摇摆运动生物反应器是当前临床试验中最常用的CAR-T细胞扩增平台，但远未标准化。提供了新的处理选项，寻求自动化，标准化和扩大生产规模的系统性工作无疑将有助于降低成本并最终使这种个性化疗法民主化。在这篇综述中，我们描述了可用的不同细胞扩增平台以及临床级生产的质量控制要求。年，FDA批准了两种基于CAR-T细胞的商业产品：Kymriah?（tisagenlecleucel，Novartis）在25岁及以下复发或无反应的儿童和年轻人的急性淋巴细胞白血病中取得了重大突破。复发性或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤和其他罕见的大B细胞淋巴瘤患者的常规治疗和Yescarta?（axicabtageneciloleucel，KitePharma/Gilead）。这些产品也在年获得EMA的批准。
图1所示的制造过程始于通常通过白细胞分离术从患者收集外周血单核细胞（PBMC）
患者的PBMC可以作为新鲜产品在本地进行处理或运送到制造工厂，也可以冷冻保存以备将来使用。一些小组使用CliniMACS系统富集或耗尽特定细胞亚群，并在激活前将各自的抗体与顺磁珠相连，这通常也用涂有CD/CD28抗体片段的珠进行，以触发T细胞杀伤机制。激活后，完成了细胞的遗传修饰，从而改善了病*（逆转录病*或慢病*载体）或非病*（裸DNA的电穿孔，基于质粒的转座子/转座酶系统）的方法。需要事先配制并使用适当的培养系统进行体外扩增并输注到患者中[4-6]。制造过程中的质量控制对于确保产品的有效性，完整性和安全性至关重要。整个过程最多可能需要22天，但是，临床试验和机构之间的时间差异很大[5]。这项审查的重点是正在使用的细胞扩增平台以及临床级生产的质量控制要求。
一、用于CAR-T细胞的细胞扩增平台
由于从患者体内分离出少量T淋巴细胞，因此需要CAR-T细胞的体外扩增，原因是它们中的大多数是白细胞减少症或其他与疾病相关的并发症。如表1所示，需要一种封闭，自动化和受控的扩增过程，以确保始终如一地保持细胞产品的关键质量属性、成本效益和风险缓解[7]。1、静态T型瓶和培养袋
静态T瓶或平板是当前临床试验中用于CAR-T细胞扩增的最传统，最简单的培养系统。与Vormittag及其同事（年）回顾了使用CAR-T细胞的已发表的临床试验，使用该培养系统扩展了种评估产品中的种[6]，其中向气体介质中的氧气传输受到小气体的限制–液体界面区域和缺乏搅拌。因此，4×细胞/mL是达到的最大细胞密度[8]。这种方法会因这种密集的操作而增加污染的风险，并且严格要求经过培训的操作员在安全柜中以敞开的方式制造产品，通常每个产品使用多个烧瓶/板，因此会影响产品的成本。使用T瓶或多层容器比透气袋和摇摆式生物反应器的成本高得多（20％），这主要是由于人工成本[8]。
由于T瓶的这种局限性，透气袋已被广泛用于CAR-T细胞的扩增。Vormittag等人（）[6]评论的产品中有5％。该袋由柔性聚合物制成，例如聚烯烃和含氟聚合物，比聚苯乙烯基烧瓶透明且刚性较低。该系统可以使用无菌对接端口和用于细胞采样，介质交换和/或添加试剂的针头进入端口以封闭的方式进行操作。主要制造商是CharterMedical，OriGen和VueLife。这些袋子的最大工作容积可达1.2L。Tumaini等（）报告说，当使用从RetroNectin预处理的培养袋中培养的B细胞慢性淋巴细胞性白血病患者中选择的T细胞进行处理时，平均扩增为10.6倍，平均转导效率为68％（逆转录病*抗CD19CAR载体），制备周期11天[1]。
2、G-Rex瓶
G-REX瓶最近得到了开发，它包括一个在底部装有可渗透膜的培养瓶，该培养瓶允许在不影响气体交换的情况下每单位表面积使用大量培养基。由于自开始培养以来就使用了大量的培养基，因此无需进行培养基交换。此外，要求低播种密度[14]。提供具有不同表面积用于细胞生长的不同瓶子。G-Rex瓶既可以作为开放系统也可以作为封闭系统运行。
对于封闭的细胞收获过程，WilsonWolf开发了半自动化系统“GatheRex”，该系统使操作员可以排出培养物中存在的过量培养基（工作量的90％），然后将浓缩的细胞收集到细胞收集袋中没有污染的风险[15]。
与传统的T瓶和孔板相比，这种培养平台具有优越的性能（细胞数量最多增加20倍），同时又减少了所需的技术人员时间（?4倍），因此引起了科学界的
